trialtusbioscience：CRISPR-Cas9 Protein  貨號：40-1320/40-1325

TriAltus Bioscience誕生于伯明翰阿拉巴馬大學的創新研究，是一家致力于將開創性的clm(CL7/Im7)純化技術商業化的衍生公司。Dmitry Vassylyev博士及其團隊開發的這一專有系統重新定義了行業中酶純度和活性的標準。

TriAltus的高純度Cas9蛋白用于CRISPR技術的基因組編輯。重組化膿性鏈球菌Cas9 (wt)蛋白在大腸桿菌具有兩個(N-末端和C-末端)核定位信號(NLS)和CL7標簽，其在純化過程中用切割前蛋白酶除去。Cas9蛋白與指導RNA (gRNA)結合，形成穩定的核糖核蛋白(RNP)復合物，使細胞中的基因組編輯高效而精確。

規范

純潔| ~99% (SDS-PAGE凝膠分析)

酶源|化膿性鏈球菌Cas9表達于大腸桿菌用兩個(N-末端和C-末端)核定位信號(NLS)，并用我們的CL7標簽技術純化。

內毒素|<0.3 EU/ug by rFC method

儲存；儲備/運輸專注度|5毫克/毫升

存儲緩沖|10 mM Tris-Cl pH 8.0，250 mM NaCl，50%甘油

推薦的儲存條件|-80攝氏度

過期|按照指示儲存時，自收到之日起6個月。避免重復冷凍/解凍循環。

圖一。與商業獲得的Cas9相比，CL7/Im7純化的Cas9的切割活性。在1.2%瓊脂糖/TAE凝膠上解析反應，然后用SYBR GOLD染色。從商業來源(CO)獲得的Cas9或CL7/Im7純化的Cas9 (Im7)與等摩爾(+)，或無(-)，退火的sgRNA復合。將不同濃度的復合物與1.1 kb的目標DNA片段在37℃下孵育15分鐘。sgRNA識別目標DNA中間的序列，切割后產生約550 bp的片段。Im7純化的Cas9顯示出與商業Cas9相當的活性。

圖二。CL7/Im7純化的Cas9和4步純化的Cas9在細胞中的活性相同。

(一)在用Lonza nucleofector 2b電穿孔和使用來自4步純化(頂行)或1步純化方案(底行)的Cas9WT改變RNP濃度后，人鐮狀細胞iPSCs(誘導多能干細胞)的相差顯微鏡檢查。

(二)中所示的電穿孔實驗的存活率和修飾表(一)。用兩種方案純化的Cas9制備的RNP用一種sgRNA進行測試，該sgRNA被設計用來糾正導致鐮狀細胞病的血紅蛋白中的1 BP錯誤。通過數字PCR評估修飾率。這些蛋白質產生了相同的生存力和修飾率，表明在細胞中具有同等的效率。這些測試是由UAB阿拉巴馬大學的蒂姆·湯斯和丁磊完成的。

SKU

100克:40-1320

500克:40-1325

上海牧榮生物科技有限公司

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